【摘要】目的  研究尖锐湿疣(CA)患者人乳头状病毒(HPV)感染的基因型别,CA患者中高危型HPV感染的情况.方法  采用基因芯片的方法对77例CA患者和同期无外阴CA的64例对照进行HPV检测及分型.结果  77例CA患者标本中检出HPV阳性64例,阳性检出率84.4%,高于对照组的18.75%(P<0.01),共检出12种HPV基因型别,其中低危型(HPV6、11、43、44)感染21例,占32.8%;高危型(HPV16、18、31、33、45、56、58、73)感染30例,占46.9%;高低危同时感染13例,占20.3%.结论 外阴CA患者HPV感染较为普遍,且高危型感染占有相当大的比例,因此对CA患者进行HPV-DNA检测,必要时进行相应治疗,以期降低宫颈癌的发病风险.
　　【关键词】尖锐湿疣  HPV  检测与分型
　　一、材料和方法
　　1.标本来源
　　标本选自2009年7月~2010年11月来我院妇科门诊诊治CA患者共77例,均有CA的典型临床表现,醋酸白试验阳性.采用剪除法剪取宫颈组织标本约0.2cm*0.2cm*0.3cm.对照组为妇科体检人群的宫颈脱落细胞标本64例.采集的标本随即放入盛有0.9%生理盐水的灭菌试管中,实验组用铝箔包裹CA组织并编号贴上标签投入液氮罐(-196℃)中冷冻保存,对照组宫颈脱落细胞在灭菌生理盐水试管中洗涤后冷冻保存.
　　2.试剂
　　HPV基因分型检测试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供.
　　3.方法
　　(1)标本DNA抽提 按照DNA抽提试剂盒说明书进行,CA组织先行用组织匀浆器磨碎,操作中避免污染,保证每份标本1管.
　　(2)基因芯片检测 23种HPV-DNA亚型采用生物素标记探针对HPV-DNA所有亚型的通用引物经GP-PCR对标本抽提DNA扩增.PCR反应条件为:50℃ UNG酶消化15min,95℃预变性10min;94℃30s,42℃90s,72℃30s,共40个循环,72℃延伸5min.固定针对HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4亚型探针的芯片.于50ml BD Falcon聚丙烯管中加入5-8ml A液(2*5sc,0.1% SDS,PH7.4),然后放入10mlGP-PCR产物和基因芯片,沸水水域10min,51℃杂交1h.将杂交后的芯片立即移至装51℃预热50ml B液(0.5*SSC,0.1%SDC,PH7.4)于51℃轻摇洗涤15min,然后将芯片转至20ml POD溶液于室温孵育30min,再用C液(0.1mol/L柠檬酸钠,PH5.0)于室温轻摇洗涤芯片1~2min后,于显色液(19ml 0.1mol%L柠檬酸钠,1mlTMB,10μl3%过氧化氢)中浸泡约10min对芯片进行显色反应.根据显色斑点在芯片上的位置判读结果.
　　二、结果
　　77例CA组织中,检出HPV-DNA阳性64例,阳性检出率84.4%.所有HPV阳性标本均成功分型,共检出12种HPV基因型别,其中低危型(HPV6、11、43、44)感染21例,占32.8%;高危型(HPV16、18、31、33、45、56、58、73)感染30例,占46.9%;高低危同时感染13例,占20.3%.对照组HPV阳性检出率为18.75%(12/64),与CA组相比较,有显著性差异(P<0.01).
　　三、讨论
　　HPV是一种小的DNA双链病毒,目前发现的能感染生殖道的HPV亚型已有100余种,临床上分为两类:宫颈癌低度相关(低危)型和高度相关(高危)型.与妇科病人相比,性病的CA患者群是100%的HPV感染人群,本次试验结果显示77例CA患者高危型(HPV16、18、31、33、45、56、58、73)感染30例,占46.9%;高低危同时感染13例,占20.3%,占有相当大的比例.此类HPV高危型感染患者,除了治疗尖锐湿疣皮损外,还应定期观察检测,对于及时发现早期癌变,减少死亡的发生率有着极为重要的意义.
　　参 考 文 献
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