奥拉西坦（oxiracetam，ORC）是一种合成的羟基氨基丁酸（GABOB）环状衍生物，又称奥拉酰胺、羟氧吡醋胺，商品名有neuromet、neupan、健朗星等，由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，并于1987年首先在意大利上市。于1990年在美国及日本上市，是治疗老年痴呆的药物之一。本研究拟采用高效液相色谱法建立奥拉西坦注射液的含量测定方法。
    1 仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪；奥拉西坦注射液（规格：5ml：1.0g，小试样品批号：120217，中试样品批号：120801、120802、120803，哈尔滨誉衡药业股份有限公司自制）；奥拉西坦注射液市售：批号：100427B，哈尔滨三联药业有限公司生产；批号：1109008，广东世信药业有限公司生产；奥拉西坦对照品：批号：101032-200901，纯度：99.7%，中国药品生物制品检定所。依地酸钙钠：批号：100306，四川新元制药有限公司生产。
    2 方法与结果本品的含量测定方法参照奥拉西坦注射液试行标准YBH01692006（哈尔滨三联药业有限公司）及原料质量标准中含量测定项下的色谱条件进行。
    2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂。以乙腈：水=90：10为流动相，检测波长为210nm，理论塔板数按奥拉西坦峰计算，应不低于2500。
    2.2 测定法精密量取本品适量，用流动相稀释定容制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取奥拉西坦对照品适量，用流动相溶解并稀释定容制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20靗，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法进行计算，即得。
    2.3 方法学验证2.3.1辅料干扰试验按处方比例加流动相制成不含奥拉西坦的辅料空白溶液、供试品溶液、对照品溶液，分别按“2.2”项下含量测定方法进行试验。结果表明：所用辅料对本含量测定方法没有干扰。
    2.3.2系统适用性试验精密量取本品，加流动相稀释定容制成0.1mg/ml的溶液，作为供试品溶液。共配制6份溶液，分别进样20靗，注入液相色谱仪。
    结果表明：6份系统适用性溶液主峰峰面积的相对标准差RSD%为0.44（<2.0%），主峰保留时间RSD%为0.09%（<1.0%），主峰对称因子均小于2.0，理论塔板数均大于2500，系统适用性符合规定。
    2.3.3 准确度采用供试品溶液中加入2倍浓度对照品贮备液的方法，分别制备拟定测定浓度80%、100%、120%的三组供试品溶液，每个浓度各制备3份溶液，共9份溶液。
    精密量取上述供试品溶液及对照品溶液各20靗，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。
    结果表明：平均回收率为100.63%，RSD%为0.71%，本方法准确度符合规定。
    2.3.4线性关系精密称取奥拉西坦对照品，加流动相超声溶解并稀释定容，制成浓度为0.2mg/ml的对照品贮备液。
    精密量取对照品贮备液，分别加流动相稀释定容，制成含量测定方法拟定测定浓度60%、80%、100%、120%、140%的溶液，分别测定其峰面积，以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归分析。
    结果表明：线性回归方程为Y=20749X+38.294，相关系数r=0.9999（>0.999）；Y轴截距=100%响应值×1.82%（<2%）；响应因子RSD%=1.05%（<2%）。当进样量为20靗时，奥拉西坦在0.06mg/ml～0.14mg/ml浓度范围内呈良好线性关系。
    2.3.5 重复性照“2.2”项下含量测定方法进行试验，重复制备6份供试品溶液进行含量测定。
    结果表明：重复性试验6份供试品溶液平均含量为100.23%，RSD%为0.48%（<1%），本方法重复性较好。
    2.3.6 进样精密度取制成浓度为0.1mg/ml的供试品溶液，连续进样6次，考察方法进样精密度。
    结果表明：6次测定供试品溶液主峰面积RSD%为0.04%（<2.0%），该检测方法进样精密度良好。
    2.3.7 中间精密度按照“2.2”项下含量测定方法进行试验，共进行6次试验，变动条件为不同日期、不同分析人员、不同高效液相检验设备。
    结果表明：设计6次试验的平均含量为100.57%，RSD%为0.63%，本方法中间精密度符合要求。
    2.3.8 溶液稳定性试验精密量取本品，加流动相稀释定容制成浓度为0.1mg/ml的供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12小时取样，按“2.2”项下含量方法测定。
    结果表明：各时间点供试品溶液主峰面积平均值为2868.735，RSD%为0.48%，供试品溶液在室温条件放置12小时内基本稳定。
    2.3.9 三批供试品测定取三批中试样品（批号：120801、120802、120803），分别精密量取1ml，置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液5ml，置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取20靗，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取奥拉西坦对照品，加流动相溶解并稀释定容制成0.1mg/ml的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，结果见表23 结束语本文按照拟定含量测定方法试验，经方法学验证结果表明，该方法专属性较好、系统适用性符合规定。准确度良好，线性关系、重复性、进样精密度、中间精密度、溶液稳定性等试验结果均符合方法学验证要求。本方法操作简便、快捷，可准确测定奥拉西坦注射液的含量。