【摘要】目的 探讨p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及其与胃癌病理参数之间的关系.方法 用免疫组化技术(sP法)对正常胃黏膜(NGM)、慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎伴非典型增生各20例和胃癌(GC)60例标本进行免疫组织化学染色,分析p27和ILK的表达与胃癌临床和病理的关系.结果 p27和ILK表达阳性率分别为:NGM组100%和5%,CSG组85%和10%,CAG伴肠化组70%和20%,CAG伴非典型增生组45%和30%,胃癌组38.3%和40%.胃癌组和CAG伴非典型增生组p27阳性率显著低于其他组(P<0.05),ILK阳性率则显著高于其他组(P<0.05).p27和ILK在胃癌中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度及肿瘤临床分期相关,p27蛋白的表达还与有无淋巴结转移相关.P27和ILK在胃癌中的表达呈显著负相关(r=一0.768,P<0.05)结论 检测胃癌组织中p27和ILK的表达有助于判断肿瘤的进展程度,两者联合检测有助于判断肿瘤预后.
　　【关键词】胃癌 p27 ILK 免疫组化
　　胃黏膜的肠上皮化生和异型增生是胃癌发生过程中重要的癌前病变,但并非所有的肠上皮化生和异型增生均演变为癌.其具有双向分化的特点,既可发展为癌,亦可恢复正常,胃癌的发生、发展是一个多基因变异累积逐渐演变的复杂过程,包括癌基因的激活和抑癌基因的失活而导致无限制增生,同时,肿瘤的发展与凋亡也有密切关系.细胞增生与凋亡的失衡导致细胞的过度积聚,可能是胃癌发生的病理基础.为探讨癌相关基因在胃癌前病变不同转归中的作用,我们检测p27、ILK在发生和未发生癌变的中重度肠上皮化生及异型增生标本中的表达.
　　1  材料和方法
　　1.1 材料
　　收集手术切除标本存档蜡块:因十二指肠穿孔行手术切除的NGM病例20例,因胃穿孔或胃溃疡行手术切        除的CSG、CAG伴肠上皮化生、CAG伴不典型增生的病例各20例,行胃癌根治术的胃癌病例60例,且均未在手术前行放、化疗.所有切片均按全国胃癌协作组提出的标准,由具有丰富经验的病理科主任医师进行复检.每例选取蜡块4μm连续切片1-2张,进行常规HE染色和免疫组化染色.
　　1.2 方法
　　p27和ILK的免疫组化测定按试剂盒说明书进行.试剂盒均购自福州迈新生物技术开发中心.采用微波抗原修复.免疫组化设阳性、阴性对照.p27阳性反应物质定位于胞核,ILK阳性反应物质定于胞质或细胞膜,每张切片在高倍视野下分别取上、下、左、右及中心共5个区域进行细胞计数,每个区计数200个细胞,共计数1000个细胞,计算染色细胞所占比例.细胞核内出现棕黄色颗粒为p27染色阳性,胞质(胞膜)出现棕黄色颗粒为ILK染色阳性,阳性细胞数<10%为二者表达阴性;阳性细胞数≥10%为二者表达阳性.
　　1.3 统计学处理
　　数据采用SPSS11.0统计学软件进行处理.采用x2检验、相关性检验方法进行分析,P<0.05有统计学意义.
　　2  结果
　　2.1  p27和ILK的表达
　　p27蛋白在NGM,CSG,CAG伴肠上皮化生,CAG伴不典型增生和胃癌组织中的阳性率分别为100%,85%,70%,55%,38.3%.ILK在上述各组中的阳性率分别为5%,10%,20%,30%,40%.
　　p27和ILK蛋白阳性表达率在胃癌组与CAG伴不典型增生组之间无显著性差异(P>0.05),而与其他各组有显著性差异(P<0.05).
　　2.2  p27和ILK表达与胃癌临床病理的关系
　　p27蛋白表达多见于浸润浅、分化好、淋巴结转移少、临床分期早的胃癌组织.其表达水平与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、分化程度、临床分期均相关(P<0.05或0.01),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、Bormann分型等无关(P>0.05).ILK表达多见于浸润深、分化差、临床分期晚的胃癌组织.其表达水平与肿瘤分化程度、浸润深度及临床分期相关(P<0.05或0.01),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、Bormann分型、淋巴结转移等无关(P>0.05).
　　2.3  p27和ILK在胃癌组织中表达的相关性
　　p27和ILK在胃癌组织中的表达呈明显负相关关系(r=-0.768,P<0.05).ILK表达阳性的肿瘤中的p27蛋白表达阳性率显著低于ILK表达阴性者(P<0.05).在中、高分化,浸润未达浆膜层,无淋巴结转移及临床I、Ⅱ期胃癌组织中,p27阳性且ILK阴性者显著多于p27阴性且ILK阳性者(P<0.01);相反,在低分化或未分化,浸润已达浆膜层,有淋巴结转移及临床Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中,p27阴性且ILK阳性者显著多于p27阳性且ILK阴性者(P<0.05或0.0l).而与性别、年龄、肿瘤大小小、肿瘤部位、Bormann分型、淋巴结转移等无关(P>0.05).
　　3  讨论
　　p27基因属于CDK抑制剂p27家族,可以直接影响细胞周期G/S期限制点的调控,阻止细胞由G1期向S期过渡.已有研究发现,p27与多种肿瘤,如乳癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、大肠癌等的预后相关.p27与胃癌临床病理之间关系的研究报告较多,但结果不尽一致.本实验表明,p27的低表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、分化程度和临床分期呈负相关,统计学有显著性差异(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、Bormann分型等临床病理参数无关.p27作为具有抑癌作用的细胞周期负调控因子,在胃癌进展过程中表达逐渐下降,功能逐渐丧失,使癌细胞更具侵袭力、恶性程度更高、淋巴结转移更快,预后更差.
　　ILK是新近发现的一个具有3个结构单位的Ser/Thr蛋白激酶,作为整合素和生长因子受体信号传导途径中的一个重要效应物,ILK调节着细胞的黏着、生存、分化和凋亡.在本组胃癌组织中,ILK的表达与肿瘤分化程度、浸润程度及肿瘤分期显著相关(P<0.05),在分化差、浸润深、分期高的肿瘤ILK表达阳性率更高,提示ILK表达与胃癌的进展有关.
　　近年来,胃癌分子标记物与临床病理关系的研究多采用同一标本中多种标记物检测方法.本研究同时检测两种分子标记物,结果显示:p27蛋白与ILK的表达呈显著负相关(r=-0.768,P<0.05).胃癌患者组中,p27表达阳性且ILK表达阴性的多为浸润浅、分化好、无淋巴结转移、临床分期为I、Ⅱ期的患者;相反,p∞表达阴性且ILK表达阳性的多为浸润深、分化差、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的患者.这可能是由于ILK表达增加,加速细胞周期从G1向s期过渡,而p27低表达失去了对CyclinE/CDK2复合物活性的抑制,二者共同作用,加速肿瘤的进展,使肿瘤更具侵袭性,恶性程度更高.
　　参 考 文 献
　　[1]WangXQ,Lui EL,CaiQ,et al.p27Kipl promotes migration of metastatic hepatocellular carcinoma cells[J].Tumour Biol,2008,29(4):217-223.
　　[2]Fielding AB,Dedhar S.The mitotic functions of integrin-linked kinase [J].Cancer Metastasis Bey,2009,1:20.