【摘要】目的 对上皮性卵巢癌中FLIP,FADD表达情况与临床分析和病例分级之间的关系进行初步研究.方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法(S-P 法)及逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR 法)检测上皮性卵巢癌中 FLIP,FADD 的表达情况,并通过免疫组化法(S-P 法)检测上皮性卵巢癌中 PCNA 的表达情况,来评价上皮性卵巢癌细胞的增殖情况.结果 按临床分期,上皮性卵巢癌中I-II期FLIP阳性表达率为30.00%(3/10),III-IV期FLIP阳性表达率79.41%(27/34);上皮性卵巢癌中III期FADD阳性表达率为 100%(10/10),III-IV期FADD阳性表达率 67.65%(23/34).按病理分级,上皮性卵巢癌中1级FLIP阳性表达率为 47.62%(10/21),2-3级FLIP阳性表达率 86.96%(20/23);上皮性卵巢癌中1级FADD阳性表达率为 71.43%(15/21),2-3级FADD阳性表达率 39.13%(9/23).结论 FLIP,FADD,PCNA 表达高低与上皮性卵巢癌组织病理分级,临床分期有关,并且 FLIP,FADD表达均与PCNA表达有相关关系;提示 FLIP,FADD 表达情况可反映上皮性卵巢癌细胞分化状态及恶性程度.
　　【关键词】F L I P ;F A D D ;上皮性卵巢癌;凋亡
　　卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病之一,且近十年来我国上皮性卵巢癌发病率有上升趋势[1].由于卵巢特殊的解剖和组织结构特点及其深居盆腔内部的特性,就诊时多数已属晚期,多有广泛转移,5年生存率徘徊于30%.与其他恶性肿瘤一样,上皮性卵巢癌的发生、发展也是一个多步骤、多阶段且有序的过程.目前已经认识到原癌基因的激活,抑癌基因的失活是细胞癌变的基础,多种原癌基因和抑癌基因的表达失常或失衡,导致细胞无控增殖,在肿瘤发生、发展和转归上起关键作用[2].
　　1 研究对象
　　1.1 病例来源
　　选取湖南省长沙市一医院和中南大学湘雅二医院妇产科2004年12月~2007年2月期间初次住院治疗的上皮性卵巢癌病例,临床及病理资料完整,手术切除组织蜡块可得并经病理确诊者纳入实验,共44例.所有患者均行首次手术治疗,术前均未接受过化疗或放疗.经手术病理确诊,其中浆液性囊腺癌22例,粘液性囊腺癌19例,子宫内膜样癌2例,透明细胞癌1例.患者年龄36~72岁,平均年龄60岁;组织病理分级按WHO分级标准:1级21例,2-3级23例.临床分期按FIGO(2000年)分期标准:I-II期10例,III-IV期34例.
　　同时选取同期收治并手术的良性卵巢上皮性肿瘤25例,正常卵巢组织25例作为对照组.其中正常卵巢病例,来自因子宫肌瘤行全子宫+双附件切除的患者.所有标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,连续切片(厚4μm).切片均做HE染色,便于与免疫组化染色对照.
　　1.2 标本采集
　　每一例标本均在手术切除后立即采集,同时取两块,一块经生理盐水冲洗后立即放入液氮罐中,并尽快转移到-80℃冰箱中保存.另一块用10%甲醛溶液固定后,常规脱水石蜡包埋保存备用.
　　1.3 方法
　　采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法(SP法)及逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测上皮性卵巢癌中FLIP,FADD的表达情况,并通过免疫组化法(S-P法)检测上皮性卵巢癌中PCNA的表达情况,来评价上皮性卵巢癌细胞的增殖情况.
　　1.4 统计学方法
　　采用统计学分析软件SPSS13.0版.以a=0.05为显著性检验水准,P<0.05时认为有统计学意义.统计学方法:用Pearson X2检验分析FLIP和FADD在上皮性卵巢癌、良性卵巢上皮性肿瘤和正常卵巢组织中的阳性表达是否有差别;用Pearson X2检验分析FLIP和FADD表达与上皮性卵巢癌临床分期、病理组织学分级、病理类型等的关系;用Spearman等级相关系数分析上皮性卵巢癌中FLIP、 FADD与PCNA表达的相关性.半定量RTPCR积分吸光度比值比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法.计量资料结果以(`x ±s)表示.
　　2 结果
　　44例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中 FLIP,FADD阳性表达率与临床分期的关系分别见表1.44例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中FLIP,FADD阳性表达率与病理分级的关系分别见表2.
　　表1 上皮性卵巢癌中FLIP,FADD表达情况与
　　3  讨论
　　凋亡又称细胞程序性死亡,是一种不同于细胞坏死的生理性死亡方式.其形态和生化方面的变化主要包括细胞皱缩、膜结构消失、染色体浓缩、DNA短裂、凋亡小体形成等[3].几乎所有的低等和高等动物的细胞均具有细胞凋亡这一功能,细胞凋亡对多细胞动物机体的正常发育和自身稳定起着重要作用.正常组织中的细胞增殖与细胞凋亡之间处于动态平衡状态;而在癌前病变或癌组织中肿瘤细胞的增殖与凋亡关系失调[4].表现为:1、细胞增殖能力加强,细胞凋亡受到抑制.2、细胞增殖无明显增强,细胞凋亡明显受到抑制.3、细胞凋亡与增殖均增强,但增殖超过凋亡,细胞不断增多.可见任何影响凋亡的改变,在肿瘤发生发展及治疗上的意义.
　　学者们普遍认为PCNA与肿瘤的组织病理分级,临床分期,浸润程度及预后密切相关,通过对细胞PCNA表达情况进行检测可以了解肿瘤组织的增殖活性[5].本研究通过免疫组化半定量法检测上皮性卵巢癌组织中FLIP、FADD的表达水平,并用PCNA检测上皮性卵巢癌细胞增殖情况发现:FLIP、FADD的表达均与上皮性卵巢癌患者性别、年龄、淋巴结转移无关;与上皮性卵巢癌组织病理分级、临床分期有关.FLIP,PCNA的表达随着上皮性卵巢癌恶性程度、临床分期的增高而增高;FADD的表达则随着上皮性卵巢癌恶性程度、临床分期增高而降低.F L I P 的表达与PCNA的表达正相关;FADD的表达与PCNA的表达负相关.
　　研究结果可提示:FLIP可能通过抑制癌细胞凋亡,参与上皮性卵巢癌的发生发展过程.它的抗凋亡作用,并伴随肿瘤细胞增殖能力的增强,可能在上皮性卵巢癌的恶性进展中起一定作用.随着肿瘤细胞的增殖能力增强,FADD的表达下降,由其决定的细胞凋亡通路,可能发生部分阻断,从而促进了肿瘤的恶变.FLIP、FADD的表达变化与上皮性卵巢癌恶性程度关系密切,这对上皮性卵巢癌基因治疗中靶基因的选择,有一定的指导意义.
　　参考文献
　　[1] 乐杰主编. 妇产科学(第6 版). 北京:学术期刊人民卫生出版社,2005,241~243.
　　[2] 高思海,潘铁成,赵金平,李军.食管鳞癌FLIP表达与细胞凋亡相关[J].世界华人消化杂志,2004;12(4):1470-1473.
　　[3] Chinnaiyan AM,Rourke K,et al.FADD,a novel deathdomain-containing protein,interacts with the deathdomain of Fas initiates apoptosis[J].J Cell,1995;81(19):505-510.
　　[4] Kidd VJ.Proteolytic activites tat mediate apoptosis[J].Annu Rev Physiol,1998;60:533.
　　[5] 顾炜,彭志海,裘国强,等.肝癌组织中凋亡信号蛋白的表达及其临床意义[J].中国肿瘤,2003;12(1):48-50