梣酮在白鲜皮中的分离及其抑菌活性实验

　　【摘要】目的  利用柱层析和高效液相在酒精提取的白鲜皮氯仿层中分离梣酮.方法  利用柱色谱分离手段分离梣酮,之后用核磁、高效液相色谱等方法进行验证,通过抑菌环实验验证其活性.结果  所提取物质谱图与相关文献一致鉴定为梣酮,纯度为97.74%,梣酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌的抑制直径为19 、20、17mm,抑菌率分别为64%、70.4%、65.7%.结论  分离物质为梣酮,且对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌均有一定的抑制活性

　　【关键词】 白鲜皮 梣酮 抑菌活性

　　白鲜皮为芸香科植物和狭叶白藓(又名新疆白鲜)的干燥根皮,味苦性寒,归脾、胃、膀胱、小肠经,是皮肤病的常用中药,具有清热燥湿、祛风解毒、杀虫止痒的功效,常用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓,湿疹、疥癣、风湿热痹、黄疽尿赤等症[1],尤其善于治疗湿疹的风热证和湿热证,在我国分布于东北、华北、华东及河南、陕西、甘肃、四川、贵州等地[2][3].梣酮为白鲜皮中主要活性物质之一,梣酮具有抗致敏T细胞增殖、抗生育、杀虫,扩张血管等活性,在药用白鲜皮中含量约为0.128%,为柱层析提取分离提供了可行性

　　1  仪器与材料

　　1.1 仪器  EYEL4 N-1100旋转蒸发仪(上海爱郎仪器)、Waters 600 controller 高效液相色谱仪,配备Waters 2487 dual λ absorbance detector(美国waters公司),Agilent TC-C18 分析柱(美国Agilent公司) 、SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(上海华宇仪器)HP5988A质谱仪(美国惠普公司)AM-400核磁共振仪(瑞士布其公司)、MP-J3熔点测定仪(日本岛津公司)、UV-Ⅲ三用紫外分析仪(北京普析通用)

　　1.2 材料 白鲜皮二氯甲烷层、石油醚30-60(分析纯)、甲醇(分析纯、迪马色谱)、超纯饮用水(娃哈哈公司),GF薄层硅胶(254、青岛海洋化工)、柱层析硅胶(青岛海洋化工),10%硫酸乙醇显色剂

　　2  方法与结果

　　2.1 化学物提取

　　称取白鲜皮氯仿层药物380.2g,采取湿法上柱方式进行装柱,以二氯甲烷和丙酮混合溶剂为洗脱液,采取梯度洗脱方法,收集馏分共计236瓶,根据薄层色谱检视,合并3-9瓶,得油状固体混合物,放置24h,沉淀后分离油层,得固体层120g,记为H1,采用石油醚丙酮系统对H1进行梯度洗脱,收集馏分共计532瓶,合并29-69瓶,记为H2,再次采用石油醚丙酮系统对H2进行梯度洗脱,收集馏分共计42瓶,合并9-37瓶,挥干有机溶剂得干燥白色晶体,采用石油醚反复润洗,挥干溶剂后,将样品溶于二氯甲烷中,重结晶后,得无色棍状结晶,重量为19g,在254nm荧光检识下有暗斑,经硫酸乙醇显色剂显色后,呈暗绿色斑点.

　　2.2 高效液相色谱检验

　　制备0.1mg/ml样品甲醇溶液,取流动相甲醇:水为60:40,峰面积为97.74%结果见图1

　　图1

　　2.3 结构鉴定

　　化合物:无色棍状结晶,mp 170℃.分子式:C15H18O2.1H-NMR(CDCl3) δ:7.47,7.44,6.34(H,Fura),4.88(1H-8,s),2.13,0.86(2×CH3,s)13C-NMR(CDCl3) δ:18.4(C-1),18.2(C-2),31.6(C-3),148.5(C-4),127.4(C-5)169.8(C-6),83.4(C-7),42.9(C-8),32.0(C-9),20.3(C-10),120.6(C-11),143.4(C-12),108.5(C-13),139.7(C-14).以上数据与文献[4]报道一致,故鉴定化合物为梣酮.

　　2.4 抑菌试验

　　配制0.1mg/ml梣酮甲醇溶液,取干净滤纸,用打孔器截取6mm直径纸片,在上述溶液中和甲醇溶液中分别浸润3片,在1小时之后取出阴干,将其分别放入3种含菌培养基中,将培养皿密封好,放入37℃培养箱中,24h后取出,测量抑菌环直径,分别对三种菌种做3次平行实验,取平均值,计算抑菌率,结果见表1

　　抑菌率(%)=(样品抑菌环直径-对照品抑菌环直径/样品抑菌环直径)×100%

　　表1  梣酮抑菌率结果

　　3  讨论

　　梣酮是药用白鲜皮中含量多且活性好的主要成分,根据白鲜皮燥湿的特点,故对其进行了抑菌方面的实验测定,证明其对三种菌群均有一定的抑制作用,在提取工艺中,根据梣酮的溶解特点,以非极性溶剂石油醚进行多次润洗纯化,之后溶于二氯甲烷中,降低温度进行重结晶,得到纯化梣酮,并通过了核磁和高效液相色谱法的验证,达到了97.74%的纯度.