灵芝孢子粉对动物学习记忆能力的影响

　　【摘要】目的  观察并比较灵芝孢子粉对小鼠学习记忆能力的影响.方法 以东莨菪碱、亚硝酸钠分别制造动物学习记忆获得障碍、巩固障碍模型,分别采用跳台、水迷宫进行测试.结果 两种造模方法均获得成功(造模后模型组与空白组比较有显著性差异),灵芝孢子粉高、中、低剂量组及脑复康组与模型组比较大多数指标均有显著差异.提示均有改善动物学习记忆能力的作用,但高中低剂量组及脑复康组四组间差异无统计学意义.结论 灵芝孢子粉对动物学习记忆能力有改善作用.

　　【关键词】灵芝孢子粉  小鼠  学习记忆  跳台  水迷宫

　　各种急慢性脑损伤均可导致学习记忆功能下降,提高学习记忆能力对改善脑损伤患者生活质量及社会适应能力无疑十分重要.本研究采用跳台法、水迷宫法观察灵芝孢子粉对由东莨菪碱、亚硝酸胺所致的小鼠学习记忆获得、巩固功能障碍的影响.

　　1、材料

　　1.1动物

　　发育期昆明种小鼠(四周龄断乳鼠),体重13~16克,雌雄各半,由福建医科大学实验动物中心提供.小鼠总共240只,雌雄各120只,雌雄各随机分成2组,这样每组各有雌雄动物60只即共有120只动物,2组分别用于以下2个实验.每组又随机分成6小组(雌雄分别随机,这样每小组各有雌雄动物10只共20只动物)6小组分别为灵芝孢子粉高剂量组、中剂量组、低剂量组、脑复康组、模型组、空白组,所用饲料为福建医科大学实验动物中心提供.所有动物每日均灌胃1次,其中高、中、低剂量组分别给灵芝孢子粉每日每只20mg/l0g,10mg/10g,5mg/10g;脑复康组给脑复康每日每只0.6g/kg;模型组及空白组均给蒸馏水每日每只0.2ml/10g,每只均按0.2ml/10g灌胃给药,连续灌胃30天.

　　1.2药品

　　低温物理破壁赤芝灵芝孢子粉(批号20111230由仙芝楼生物科技有限公司提供),脑复康(批号20120102,扬州市星斗药业有限公司出品),氢溴酸东莨菪碱(批号20111109,广州明兴制药厂出品),亚硝酸钠(批号20100908,广州番禺力蒸馏强化工厂出品).

　　1.3仪器

　　小鼠跳台仪(STT.2型医科院药物所研制)小鼠水迷宫(自制模仿医科院药研所研制的SMG.2型).

　　2 方法与结果

　　2.1灵芝孢子粉粉对东莨菪碱所致的记忆获得障碍小鼠学习记忆能力的影响

　　用小鼠跳台仪进行实验.从6小组中每组各随机抽取雌雄动物各7只,这样每组14只,6组共84只.试验前15分钟空白组给予腹腔注射生理盐水0.1ml/10g,其余各组均给予氢溴酸东莨菪碱3mg/kg腹腔注射.试验前先将小鼠放入跳台中适应3分钟然后通电36伏,小鼠受电击会跳上平台躲避电击,间隔一段时间会再次跳下.记录5分钟小鼠受电击次数为错误次数.以上为学习训练阶段.24小时后重测,观察5分钟,在通电情况下先将小鼠放在平台上,观察在平台上停留时间即潜伏期,跳下触电次数(错误次数)以及跳下动物数.实验结果

　　经SPSSl0.0软件处理(所用检验方法为One-way Anove LSD  Kruskal Wallis Test Chi-Square Tests),具体结果如表1.

　　表1跳台实验结果

　　注:与模型组相比水*P<0.05

　　结果:在学习训练阶段:错误次数在各组之间有显著性差异(P=0.015),与模型组比较:高、中剂量组,脑复康组,空白组P值均小于0.05,可以看出高剂量组、中剂量组、脑复康组、空白组都与模型组有显著性差异.在测试阶段:潜伏期在各组之间有显著性差异(P=0.016)由长到短依次为空白组、低剂量组、脑复康组、中剂量组、高剂量组、模型组.错误次数在各组之间有显著性差异(P=0.047),与模型组比较:高、中、低剂量组,脑复康组,空白组均有显著性差异(P值均小于0.05).跳下动物数由高到低分别为模型组、低剂量组、中剂量组、脑复康组、高剂量组、空白组,但在统计学上没有意义(P=0.060).以上各指标在高、中、低剂量组,脑复康组之间差异无统计学意义.可以看出1、造模成功.2、该产品及脑复康均有改善东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍的作用且这种作用在高中低剂量组及脑复康组之间无显著性差异.

　　2.2 灵芝孢子粉对亚硝酸钠所致的记忆巩固障碍小鼠学习记忆能力的影响

　　用水迷宫法测试.6组共用84只动物,每组14只,动物抽取方法同前.模仿医科院药研所研制的SMG一2型水迷宫(结构线路图略).全部训练分三阶段完成.第一阶段:用挡板挡在A处,使动物学习由该处游至终点.第二阶段:用挡板挡在B处,使动物学习由该处游至终点.第三阶段:将动物放在起点让动物学习由该处游至终点.训练中可适当用木棒加以引导.每一阶段间隔2小时.末次训练后休息2小时,将其放在台阶附近.让其爬上台阶两次,而后将其放在起点让其自行到达终点,记录其到达终点时间及进入盲端次数(错误次数),超过3.5分钟未到按3.5分钟计算.以上为学习训练阶段.测试完后立即皮下注射亚硝酸钠125mg/kg(空白组注射生理盐水0.1ml/10g).24小时后重新测试,方法同上.实验结果经SPSSl0.0软件处理(所用检验方法为One-way Anove LSD)具体结果如表2

　　表2  水迷宫实验结果

　　注:与模型组相比 *P<0.05

　　结果:在学习训练阶段:错误次数由大到小依次为高剂量组、模型组、空白组、中剂量组、脑复康组、低剂量组,但它们之间差异无统计学意义(P=0.696)到达终点时间由长到短依次为空白组、模型组、中剂量组、脑复康组、高剂量组、低剂量组,但它们之间差异并无统计学意义(P=0.768).在测试阶段:错误次数在各组之间有显著性差异(P=0.042),其中模型组最高,与模型组相比较:中、低剂量组、脑复康组、空白组与它大的差异都有统计学意义(P值均小于0.05).到达终点时间各组之间也有显著性差异(P=0.047),以模型组时间最长.与模型组比较,高、中、低剂量组及空白组与它的差异都有统计学意义(P值均小于0.05).不论是错误次数还是到达终点时间,高、中、低剂量组及脑复康组之间并无显著性差异.以上说明:1、造模成功.2、该产品有改善亚硝酸钠所致的小鼠记忆巩固障碍的作用,且高中低剂量组及脑复康之间并无显著性差异.

　　讨论:上述观察学习记忆能力所用两种方法即跳台法、水迷宫法都是文献报道比较多的经典方法,所用两种动物模型均为比较成熟的模型,因而能够比较全面地反应灵芝孢子粉对学习记忆能力的影响.《神农本草经》指出:赤芝"苦、平、无毒","益心气,补中,增智慧,不忘".提示赤芝有改善学习记忆能力、提高智力的作用.赤灵芝孢子粉是灵芝的精华,含有丰富的多糖,三萜,蛋白质、氨基酸,脂肪酸等成分,具有营养调节神经功能等作用.低温破壁的灵芝孢子粉比较完整地保存了其中的绝大多数成分.上述用跳台法、水迷宫法证明了该产品可以提高发育期小鼠的学习记忆能力、改善由东莨菪碱、亚硝酸钠所致的学习记忆获得、巩固障碍.其效果与脑复康无显著差异,同时灵芝孢子粉又有脑复康所不具备的全身调节保健功效,值得在脑神经损伤患者中推广,另外对青少年提高学习成绩也应该有好处.高中低剂量组之间功效无显著性差异而高低剂量相差4倍,说明用适当的量即可达到效果,平时以常用量服用应该也可达到理想效果.