【摘要】 目的 观察当归对博莱霉素所致的肺间质纤维化大鼠的肺形态学及胶原的影响,探讨其作用机制.方法 36只大鼠随机分为对照组、模型组及当归组.气管内注入博莱霉素复制大鼠肺间质纤维化模型,次日当归组每日腹腔内注射当归注射液150mg/kg,代写博士论文于第7及第28天每组分别处死6只大鼠,观察肺间质纤维化形成的病理变化及血清Ⅰ型胶原的含量.结果 当归能明显减轻肺泡炎和肺纤维化程度,与模型组比较,当归组血清Ⅰ型胶原含量于第7、28天明显降低(P均<0?05).结论 当归能减慢肺间质纤维化的进程,对肺间质纤维化有一定的保护作用.
　　【关键词】 当归;博莱霉素;肺纤维化;胶原
　　肺间质纤维化预后较差,治疗肺间质纤维化的有效药物为糖皮质激素和免疫抑制剂,但其副作用较多,因而应用受到限制.国内学者正积极探索无副作用的中药抗氧化剂对肺纤维化的治疗作用.研究表明当归具有较强的抗氧自由基作用[1],本研究旨在观察当归对博莱霉素所致肺纤维化大鼠的肺形态学及胶原的影响.
　　1. 材料和方法
　　1.1 肺纤维化模型的制备[2]和处理:体重180~240g的SD大鼠36只,雌雄不拘,随机分为正常对照组(对照组)、博莱霉素组(模型组)和当归治疗组(当归组),每组12只大鼠.对照组一次性气管内注入0?9%氯化钠溶液0?1ml/100g,模型组和当归组均采用一次性气管内注射等容积博莱霉素(5mg/kg体重)复制大鼠肺纤维化模型.次日当归组每日腹腔内注射当归注射液150mg/kg体重(批号20000905,规格100mg/2ml,山西永济市制药厂生产),模型组和对照组每日腹腔内注射等容积的0?9%氯化钠溶液.于实验后第7天及第28天分两批处死大鼠,每次每组6只,取血测定Ⅰ型胶原含量,取左肺全肺行肺组织病理检查.
　　1.2 观察指标及测定方法
　　1.2.1 病理学检查:分别做HE及Masson三色染色,根据Szapiel等[3]提供的方法确定肺泡炎及肺纤维化的程度.形态学定量:每组12只大鼠,每只大鼠从肺尖至肺底每隔3mm等距离切片6~12张,切片厚度6μm,每张切片观察5个视野,取平均值.将切片置于CIAS-1000型图像分析仪(北京大恒图像视觉有限公司生产)上,在10倍物镜下,应用体视学测试系统(由丹麦Aarhus大学提供)以点计数法[4]测算肺泡体密度(Vva)及肺间质体密度(Vvi).
　　1?2?2 胶原的测定:采用ELISA法测定血清Ⅰ型胶原的含量(Ⅰ型胶原ELISA试剂盒购自大连泛邦公司),严格按说明书操作步骤进行操作.通过550型酶标仪(美国制造)比色,得出吸光度A值.由标准曲线计算出样品中Ⅰ型胶原的含量.
　　1?3 统计学方法:应用SPSS 10?0软件进行方差分析及q检验.
　　2 结果
　　2?1 病理组织形态学改变:肺大体形态所见:对照组双肺未见明显病变;模型组在实验的第7天双肺见密集的点状出血、灶状淤斑,肺体积增大;第28天双肺苍白,体积缩小,表面结节样改变.当归组第7天双肺见散在的点状出血,肺体积轻度增大,第28天双肺体积增大,局部见散在的结节样改变,表面有陈旧出血点.
　　光镜下所见:对照组大鼠肺结构清晰,未见明显改变.模型组在实验的第7天肺泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润,成纤维细胞开始增多;第28天肺泡结构破坏,肺泡壁显著增厚,肺纤维化瘢痕形成.当归组与模型组比较,在实验的第7天炎性细胞浸润较轻,第28天肺泡壁轻度增厚(见图1~3).
　　2?2 于实验的第7、28天各实验组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度间的差别有显著性意义(P<0?05).
　　当归组及模型组于第7、28天肺间质体密度显著高于对照组、肺泡体密度均显著低于对照组(P均<0?01);与模型组比较,当归组于第7、28天肺间质体密度显著低于模型组(P均<0?05)、肺泡体密度高于模型组(P均<0?05).
　　2?3 各组大鼠血清Ⅰ型胶原的含量:从表3可以看出,与对照组比较,模型组于第7、28天Ⅰ型胶原含量高于对照组(P均<0?01),当归组于第7天开始增高,第28天增高明显(P<0?01);与模型组比较,当归组于第7、28天Ⅰ型胶原含量降低(P均<0?05).
　　3 讨论
　　特发性肺间质纤维化(idopathic pulmonary fibrosis, IPF)发病机制不清,大量研究表明与氧自由基所致损伤有关.当归是中医重要的补血活血药物,其抗血小板聚集、促进血浆纤维蛋白溶解,增加血容量,改善微循环的作用早已得到公认,同时具有免疫调节作用,其有效成分阿魏酸有明显的抗脂质过氧化作用[5].本组实验结果显示,模型组病理学改变早期肺泡炎明显,第7天开始出现肺纤维化, 28天纤维化已成为主要病变,与文献报道一致[6],提示本组肺间质纤维化模型复制成功.当归组于第7、28天肺泡炎和肺纤维化程度有所减轻,肺间质体密度降低、肺泡体密度增加,结果表明当归有一定的抗炎和抗纤维化作用,可能为其抗脂质过氧化作用所致,其次可能与其改善微循环作用有关.
　　胶原是细胞外间质的主要成分,胶原积聚是肺间质纤维化的一个重要特征.实验证实,在大鼠和人肺间质纤维化的肺组织有胶原代谢紊乱,表现为Ⅰ型和Ⅲ型胶原比例失调,胶原在肺间质中积聚[7].已知肺成纤维细胞是Ⅰ型胶原的主要来源,肺纤维化患者Ⅰ型胶原显著增加,从而导致Ⅰ型与Ⅲ型胶原比例失调,形成肺纤维化.本组实验结果显示,模型组Ⅰ型胶原含量于第7天开始增高,第28天明显高于对照组,与成纤维细胞增生相一致;当归组第7天时无明显变化,第28天时高于对照组.当归组Ⅰ型胶原含量于第7、28天均较模型组低,表明当归具有一定的抗纤维化作用.此仅为动物实验结果,我们正进一步对IPF患者进行研究,使中药当归在治疗IPF中发挥重要作用.
　　参考文献:
　　1 胡天喜,陈季武,李承珠?用化学发光法检测丹参、红藤、当归、黄芪等中药制剂的抗自由基作用[J]?上海中医药杂志, 1988, 9:28-30
　　2 Thrall RS. Differential cellular analysis of bronchoalveolar lavage fluid obtai ned at various stages during the development of bleomycin-induced pulmonary in the rat [J].  Am Rev Respir Dis, 1982, 126: 488
　　3 Szapiel SV, Elson NA, Fulmer JD. Bleomycin-induced interstitial pulmonarydisease in the nude, athymic mouse [J]. Am Rev Relspir Dis,1979, 120: 893
　　4 郑富盛?细胞形态立体计量学[M]?北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社, 1990, 23
　　5 吴东方,张洪,周本宏,等?阿魏酸钠抗肝脂质过氧化作用机制探讨[J]?中国中药杂志, 1996, 21 (5): 297
　　6 马靖,何冰,李楠,等?阿奇霉素对博莱霉素致大鼠肺损伤的干预作用及其机制的探讨[J]?中华结核和呼吸杂志, 2002, 25(7): 392-395
　　7 蔡后荣,郑培德,戴令娟,等?肺间质纤维化前胶原和肿瘤坏死因子基因α表达[J]?中华结核和呼吸杂志, 1998, 21 (12): 753-755